保持手術間“相對密閉狀態(tài)”，保證空氣的潔凈度：應保持層流手術室物品相對固定，盡量減少工作人員進出次數(shù)。手術室凈化采用空氣潔凈技術對微生物污染采取程度不同的控制，達到控制空間環(huán)境中空氣潔凈度適于各類手術之要求；并提供適宜的溫、濕度，創(chuàng)造一個潔凈舒適的手術空間環(huán)境。由于手術室要嚴格控制低細菌數(shù)及低麻醉氣體濃度，所以層流超凈裝置的穩(wěn)定性是層流凈化手術室的重要驗收指標。層流手術室不同級別的層流系統(tǒng)，其控制空間環(huán)境中的空氣置換率也不同，潔凈度級別越高，置換率越快，反之亦然。層流手術室墻壁應用具有抑菌作用的特殊涂料粉刷，光線明亮，色彩柔和且不須用水清潔沖洗。手術室凈化由于歐美手術室潔凈標準與中國環(huán)境存在細微差別，常規(guī)的國際標準和國內區(qū)域行業(yè)標準都普遍難于確保手術室凈化的長期穩(wěn)定（一般只能3-10年重建、低檔工程1年即需要翻新），所以在工程質量方面出現(xiàn)了明顯的檔次劃分。一些知名凈化工程公司，在通行標準之外，基本都設有自身執(zhí)行的高于國際化通行標準的凈化指標。
常規(guī)用的手術耗材、液體、藥品等均在層流手術室的玻璃墻柜中分類放齊、放全，位置（position )相對固定，保持基數(shù)；把與手術相關的各種儀器（appliance）如電刀、顯微鏡、腹腔鏡等固定在手術間，各類物品分類、分規(guī)格(specifications)擺放，標識清楚，使物各有位、過目知數(shù)、一目了然。 每天專人負責巡查及添置室內物品并登記；手術人員及參觀者(visitor)進入手術室后，盡量減少走動，各項動作要輕柔，勿在手術室抖動各種敷料。手術過程中保持前后門關閉，以避免頻繁（frequency)開關時空氣流動污染；盡量避免一位巡回護士同時巡回多臺手術，保證手術間處于相對封閉狀態(tài)。
強化清潔管理，減少各種污染的機會：層流手術室的一切清潔工作必須采用濕拭打掃，在凈化空調系統(tǒng)運行中進行。每天早晨濕拭并用消毒液"擦拭(cleanse) "手術室的物品，濕拭拖地并用消毒液擦洗墻面。層流手術室地面保持整潔，術中如有血液、體液濺到儀器（appliance）或地面，及時用浸濕消毒液的抹布擦拭；手術間設有尖銳物收集箱、感染類垃圾收集袋及非感染性垃圾收集袋，術中產生的垃圾分類放置，術后集中處理，每臺手術結束后器械護士將污染敷料置于污物車內，由工人從污物通道運出，減少對地面的污染，減少污物在室間停留時間；每次手術完畢用消毒液擦拭手術間的無影燈、器械臺、手術床、床墊和體位墊及其他物品表面，并用消毒液濕拭清潔地面。
每周進行徹底（thorough)的清潔工作，不同級別的層流手術室使用各自專用的拖把以防止交叉感染，并用500 mg/L的含氯消毒劑浸泡消毒。每星期清洗初效過濾網(Filter mesh)1次，出風口1次，并用消毒液"擦拭(cleanse) "回風口過濾網。中效、高效過濾網每2年更換1次。 塑膠(相關聯(lián)事物:塑料)地板定期請清潔公司用專業(yè)單圓機清洗加打蠟(candle)(wax)。每月對潔凈手術室內空氣潔凈度和物體表面進行特殊結構:莢膜、鞭毛、菌毛（fungus)監(jiān)測（Food Monitor)。加強出入口的管理：在層流手術室大門及無菌（fungus)(意思:沒有活菌（fungus))區(qū)入口處鋪設易清洗且可用消毒液浸泡的地墊，每日更換，這將對進出的推車及其車輪起到除塵和消毒作用。設立交換廳，嚴格區(qū)分室內車、室外車，病人由病人通道入室，進出必須更換交換車。每日增加交換區(qū)清潔地面的次數(shù)。